Tothom sap que hi ha molts laboratoris, per tant, quanta gent sap sobre els laboratoris de PCR? I quins són els requisits bàsics per dissenyar laboratoris de PCR? Després hi haurà VOLAB Xiaobian per parlar amb tothom~
1, disseny del laboratori de PCR
El laboratori de proves d'amplificació de PCR es divideix en principi en quatre àrees de treball separades: àrea d'emmagatzematge i preparació de reactius, àrea de preparació de mostres, àrea de preparació i amplificació de la barreja de reacció d'amplificació i àrea d'anàlisi de productes d'amplificació. Per evitar la-contaminació creuada, l'entrada a cada àrea de treball ha de seguir estrictament una única direcció, és a dir, només des de l'àrea d'emmagatzematge i preparació de reactius → àrea de preparació de mostres → preparació de la barreja de reacció d'amplificació i àrea d'amplificació → àrea d'anàlisi del producte d'amplificació. La transferència de reactius i mostres entre cada zona experimental s'ha de realitzar mitjançant una finestra de transferència.
2. Laboratori Disseny del Sistema de Ventilació d'Aire Condicionat i Control de Pressió
Els laboratoris de PCR no tenen requisits de purificació estrictes, però per tal d'evitar la possibilitat de contaminació creuada-entre les diferents àrees experimentals, és recomanable utilitzar un sistema de distribució d'aire-complet. Al mateix temps, la proporció d'enviament i esgotament s'ha de controlar estrictament per garantir els requisits de pressió de cada àrea experimental.
2.1, zona de preparació de mostres
Les principals operacions en aquest àmbit són la conservació de mostres, l'extracció d'àcids nucleics (ARN, ADN), l'emmagatzematge i la seva incorporació a tubs de reacció d'amplificació i la determinació de la síntesi d'ADN. Els requisits de gradient de pressió en aquesta àrea són: pressió positiva relativa a l'àrea adjacent per evitar la contaminació d'aerosols de l'àrea adjacent a aquesta zona. A més, a causa de la possibilitat de contaminació induïda per aerosol-durant l'operació de càrrega, s'ha d'evitar caminar innecessàriament per la zona.
2.2. Zona d'emmagatzematge i preparació de reactius
Les principals operacions en aquesta àrea experimental són la preparació de reactius d'emmagatzematge, la dispensació de reactius i la preparació de les mescles de reacció principals. Els reactius i els materials utilitzats per a la preparació de mostres s'han d'enviar directament a aquesta zona i no han de passar per altres zones. Les matèries primeres reactives s'han d'emmagatzemar en aquesta zona i preparar-les a la zona en els reactius d'emmagatzematge necessaris. No hi ha requisits estrictes per al control de la pressió de l'aire.
2.3, àrea d'anàlisi de productes d'amplificació
L'operació principal en aquesta àrea és la determinació de fragments amplificats. Aquesta zona és la principal font de contaminació del producte amplificat. Per tant, els requisits de gradient de pressió per a aquesta àrea són: Pressió negativa relativa a l'àrea adjacent per evitar la difusió de productes amplificats de la zona a altres zones.
2.4, preparació de la barreja de reacció d'amplificació i zona d'amplificació
La principal operació en aquesta àrea és l'amplificació de l'ADN. A més, en aquesta zona també es pot fer l'addició de la plantilla d'ADN preparada (de la zona de preparació de la mostra) i de la mescla principal de reacció (de la zona d'emmagatzematge i preparació de reactius) per preparar una mescla de reacció, etc. Els requisits de gradient de pressió en aquesta zona són: pressió negativa relativa a la zona adjacent per evitar fuites d'aerosols de la zona. Per tal d'evitar la contaminació causada pels aerosols, s'ha de minimitzar els desplaçaments innecessaris per la zona. Les operacions individuals, com ara el mostreig, s'han de realitzar al banc net.
3.1. Divisió estricta de l'àrea de treball
(1) La configuració de cada àrea experimental és raonable;
(2) Cada àrea experimental hauria de tenir marques òbvies (com ara números de casa sorprenents o diferents colors de fons, etc.) per evitar confusions entre els equips i els reactius en diferents àrees experimentals.
3.2, configuració raonable del sistema
(1) Configuració raonable del sistema de ventilació-aire condicionat; proveu d'utilitzar el sistema de-aire condicionat-complet;
(2) El control estricte de la pressió del flux d'aire garanteix diferents requisits de pressió en diferents àrees experimentals.
3.3, l'operació estàndard
(1) Els tècnics del laboratori d'inspecció d'amplificació han de realitzar--formació laboral i només poden participar en proves clíniques d'amplificació de gens després d'aprovar la formació;
(2) Durant l'operació experimental, l'operador ha de portar guants i substituir-los amb freqüència. A més, l'ús de taps d'un sol ús durant el funcionament també és una mesura eficaç per prevenir la contaminació;
(3) Els treballs de neteja són oportuns i correctes. Un cop acabat l'experiment, la zona s'ha de netejar immediatament. A més dels líquids desinfectants convencionals per a la desinfecció de superfícies o la irradiació i desinfecció de làmpades ultravioletes, alguns equips experimentals també s'han de sotmetre a esterilització a alta pressió.
3.4, gestió estricta
(1) Controlar estrictament el personal que entra i surt del laboratori. Les persones alienes a l'experiment no han d'entrar ni sortir del laboratori a voluntat i, si és necessari, han d'establir passadissos i portes independents d'entrada i sortida de tota l'àrea experimental.
(2) Minimitzeu els camins innecessaris a la zona experimental per reduir la possibilitat de-contaminació creuada.
(3) L'àrea d'anàlisi del producte amplificat és la font més important de contaminació del producte amplificat. La solució residual no es pot abocar al laboratori. S'ha de sucar en la solució desinfectant i després rebutjar-lo en un lloc allunyat del laboratori. Les puntes utilitzades són d'un sol ús. Els materials també s'han de desinfectar i esterilitzar i després tractar-los de manera uniforme, com ara la incineració;
(4) L'àrea d'anàlisi de productes d'amplificació pot utilitzar determinades mutacions genètiques i substàncies tòxiques, i s'ha de prestar especial atenció a la protecció de seguretat de l'experimentador.
3.5. Instal·lacions completes de laboratori
Les instal·lacions completes de suport del laboratori són condicions necessàries per garantir el treball experimental. Els equips i instruments corresponents s'han d'equipar segons els diferents continguts experimentals de cada laboratori, com ara bancs ultra-netes, centrífugues i alimentadors de mostres.